Indicações para o teste:

• Identificar pacientes com alto risco para a síndrome de Lynch (câncer colorretal hereditário sem polipose).
• Usado na tomada de decisão clínica no contexto das implicações prognósticas e terapêuticas associadas aos fenótipos de instabilidade de microssatélites (MSI-H).
• Prognóstico e preditivo de câncer de cólon.
• Propensão maior para responder ao tratamento com imunoterapias (p. ex. anti-PD1).

Procedimento e interpretação do teste:

• Tipo de amostra: tecido tumoral, e sangue periférico.
• Preparação da amostra: Fixação de formalina (formalina tamponada neutra a 10%) e tecido embebido em parafina. Proteger do calor excessivo. O bloco de tecido será devolvido após o teste. Bloco de tecido ou 4 lâminas de 5 mícrons não coradas. (Mínimo: 3 slides). 
• Extração de DNA, avaliação qualitativa e quantitativa.
• Metodologia: O exame de instabilidade de microssatélites é realizado por análise de fragmentação (PCR + análise de fragmentos por eletroforese capilar). Examinamos cinco mononucleotídeos (Painel Bethesda).
• Microssatélites: BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, MONO-27 e três repetições de dinucleotídeos (D2S123, D17S250, D5S346) Também detectamos mutações nas regiões codificadoras dos genes MMR hMLH1, hMSH2, hMSH6 e PMS2.

Relevância clínica:

A forma mais comum de carcinoma colorretal hereditário é a síndrome de Lynch, um câncer colorretal hereditário sem polipose (HNPCC). A instabilidade de microssatélites é detectada em 90% dos tumores HNPCC e em 15% dos carcinomas colorretais esporádicos.

Pacientes com síndrome de Lynch também têm um risco aumentado de câncer do trato urogenital e outros carcinomas.

A herança desta doença é autossômica dominante. A causa da síndrome de Lynch é uma mutação germinativa em um dos genes responsáveis pela reparação de erros de replicação do DNA (mismatch repair genes-MMR genes), resultando na formação de tumores que são característicos com alto grau de instabilidade em curtas repetições em tandem de DNA (microssatélites). Esses tumores são, portanto, referidos como MSI-H (instabilidade de microssatélites alta).

Para o diagnóstico diferencial de MSI-H é frequentemente utilizada a detecção da mutação BRAF (V600E). Não existe tal mutação na síndrome de Lynch.

Um subgrupo de HNPCC é a síndrome de Muir-Torre (MTS), característica por tumores benignos e malignos da pele sebácea em combinação com malignidades internas. A alta instabilidade de microssatélites está presente em aproximadamente 70% desses tumores.

As proteínas MMR montam-se em complexos funcionais: heterodímero hMSH2-hMSH6 e heterodímero hMLH1-hPMS2. O primeiro desses dímeros reconhece erros no DNA e indica danos, enquanto o segundo corrige esses erros. Ao mesmo tempo, participa da parada do ciclo celular e indução de apoptose em resposta a danos no DNA.

O gene hMLH1 está localizado no cromossomo 3 na região p21.3 e possui 19 éxons. O gene hMSH2 está localizado no cromossomo 2 na região p21-22, contendo 16 éxons e na região p16 existe um gene hMSH6 composto por 10 éxons. O gene hPMS2 está localizado na região cromossômica 7p22.

Casos com MSI-estável podem ser interpretados como esporádicos ou indivíduos numa fase precoce da patologia, dependendo do status genético e epigenético (mutação e metilação) de genes MLH1 e MLH2.

Resultados e considerações:

• Negativo: o número de repetições dos microssatélites no tecido tumoral é igual ao encontrado no sangue periférico.
• Positivo: alta-MSI se mais de um dos marcadores registarem instabilidade; baixa-MSI se somente um dos marcadores registar instabilidade.

Os resultados devem ser interpretados no contexto dos achados clínicos, história familiar e outros dados laboratoriais. A interpretação incorreta dos resultados pode ocorrer se as informações fornecidas forem imprecisas ou incompletas.

Referências:

1. Renkonen E, Zhang Y, Lohi H, et al: Altered expression of MLH1, MSH2, and MSH6 in predisposition to hereditary nonpolyposis colorectal cancer. J Clin Oncol. 2003 Oct 1;21(19):3629-37. doi: 10.1200/JCO.2003.03.181. PMID: 14512394.
2. Loukola A, Eklin K, Laiho P, et al: Microsatellite marker analysis in screening for hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC). Cancer Res. 2001. June 1;61(11):4545-9.
3. Raedle J, Trojen J, Briege A, et al: Bethesda guidelines: relation to microsatellite instability and MLH1 promoter methylation in patients with colorectal câncer. Ann Intern Med. 2001 Oct16;135(8Pt1):566-76.