Indicação para o teste:

• Preditivo:
  • Identificação de glioblastomas que podem responder à quimioterapia alquilante.
• Prognóstico:
  • Glioblastomas recém-diagnosticados.

Procedimento e interpretação do teste:

• Tipo de amostra: tecido tumoral.
• Preparação da amostra: Fixação de formalina (formalina tamponada neutra a 10%) e tecido embebido em parafina. Proteger do calor excessivo. Pelo menos 40% do tumor é necessário para este ensaio. Em geral, uma área de tecido de 6 mm x 3 mm cortada com 5 mícrons de espessura é a quantidade mínima de tecido necessária; isso pode ser coletado em vários slides. (Mínimo: 3 slides).
• Extração de DNA, avaliação qualitativa e quantitativa.
• Metodologia: O DNA é amplificado para detectar a presença de metilação do promotor do gene MGMT.

Relevância clínica:

Os gliomas representam os tumores cerebrais mais comuns. Hoje em dia, os agentes alquilantes são frequentemente usados como tratamento para gliomas (por exemplo, temozolomida). Essas substâncias levam à alquilação da guanina no DNA na posição O6 e, assim, levam à formação de ligações entre as cadeias adjacentes na dupla hélice do DNA e, posteriormente, à apoptose.

A proteína reparadora celular MGMT (O[6]metilguanina-DNA metiltransferase) é uma enzima de reparo de DNA, que remove essa alquilação da guanina e isso leva à resistência à quimioterapia com agentes alquilantes.

O silenciamento epigenético do gene MGMT pela metilação do promotor resulta na diminuição da expressão da proteína MGMT, redução da atividade de reparo do DNA e potencial aumento da sensibilidade à terapia.

O status de metilação do promotor MGMT foi mais amplamente avaliado pelo método de PCR específico de metilação, que é sensível e específico.

Pacientes com essa metilação são sensíveis ao tratamento com agentes alquilantes e sobrevivem por mais tempo. A frequência de metilação do promotor MGMT em glioblastomas está entre 40 - 45%.

Para pacientes idosos (>60 anos), que geralmente apresentam tolerância diminuída à quimiorradiação agressiva combinada, ensaios clínicos recentes forneceram fortes evidências que sustentam uma estratégia terapêutica alternativa que consiste em monoterapia com o agente alquilante temozolomida para pacientes cujos tumores apresentam metilação do promotor MGMT e radioterapia isolada para pacientes cujos tumores não possuem metilação do promotor MGMT.

Resultados e considerações:

A ausência de metilação do promotor MGMT é um fator prognóstico desfavorável para pacientes com glioblastoma, e sugere que terapias alquilantes podem ter valor limitado para este paciente.

Resultados negativos não descartam a presença de metilação que pode estar presente, mas abaixo do limite de detecção para este ensaio (aproximadamente 15%).

Embora raras, mutações e variantes dentro das regiões do promotor MGMT, as quais os primers são desenhados podem resultar na falha de amplificação da região ou detecção da presença de metilação.

A presença de metilação do promotor MGMT em outros tumores: Altas taxas de metilação do promotor MGMT foram relatadas em oligodendrogliomas e astrocitomas de grau inferior, nos quais se correlacionam de forma variável com codeleção 1p19q e mutações IDH. Desta maneira, o significado prognóstico e preditivo do status de metilação do promotor de MGMT nesses tumores foi demonstrado em alguns estudos.

Referências:

1. Hegi ME, Diserens AC, Gorlia T, et al: MGMT gene silencing and benefit from temozolomide in glioblastoma. N Engl J Med. 2005 Mar 10;352(10):997-1003. doi: 10.1056/NEJMoa043331. PMID: 15758010.
2. Kitange GJ, Carlson BL, Mladek AC, et al: Evaluation of MGMT promoter methylation status and correlation with temozolomide response in orthotopic glioblastoma xenograft model. J Neurooncol 2009 Mar;92[1]:23-31.
3. Uno M, Oba-Shinjo SM, Camargo AA,et al: Correlation of MGMT promoter methylation status with gene and protein expression levels in glioblastoma. Clinics (Sao Paulo). 2011;66(10):1747-55. doi: 10.1590/s1807-59322011001000013. PMID: 22012047; PMCID: PMC3180167.
4. Wick W, Weller M, van den Bent M, et al: MGMT testing--the challenges for biomarker-based glioma treatment. Nat Rev Neurol. 2014 Jul;10(7):372-85. doi: 10.1038/nrneurol.2014.100. Epub 2014 Jun 10. PMID: 24912512.